《表2 CRISPR/Cas9系统脱靶位点分析与检测》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《CRISPR/Cas9介导烟草多基因编辑体系的应用》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

由于与靶序列的相似，Cas9可能出现非特异性切割而发生脱靶现象。为了分析本文所构建的CRISPR/Cas9多基因编辑系统是否存在脱靶现象，我们将PCS1、eIF4E、TOM3、TOM1和HMA2基因的靶位点序列与烟草基因组数据进行了对比分析，根据（（N）12NGG）的原则和PAM区上游序列（12 bp）决定靶位点特异性的原则[31，32]，分别在烟草全基因组范围内各筛选了一个最有可能脱靶的候选位点，如表2所示，各基因靶位点从第8-10位点开始到PAM序列，完全与脱靶候选位点序列匹配。通过设计特异性引物，在5个基因都有突变的7株阳性植株中扩增候选脱靶位点的DNA片段，测序结果表明并未发现突变序列，这表明本实验所构建的CRISPR/Cas9系统具有较高的特异性。