《表1 sgRNA序列设计》

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《CRISPR/Cas9系统介导GFP在兔H11位点的定点整合研究》

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利用CRISPR/Cas9在线设计工具（http://tools.genomeenging.org）根据预测的H11位点和周边序列，以DNA正义链（反义链）的序列GGN18NGG（GGN17NGG）为靶位点设计两条sgRNA，引物见表1。取100μmol/L的sgRNA上游和下游引物各10ul，放置于95℃水浴5 min后，关闭水浴锅，在水浴中冷却至室温，退火，获得带有粘性末端的双链CRISPR/Cas9。