《表1 sgRNA靶点寡核苷酸序列》

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《利用CRISPR/Cas9系统构建Lrtm1基因敲除的C2C12细胞系》

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Lrtm1基因位于小鼠14号染色体，基因全长15 437个碱基，含有3个外显子，位置分别位于360～404、3 417～4 012、9 120～9 549。根据碱基特异性在1号和2号外显子上共设计3段sgRNA靶点序列（图1）。并且分别在sgRNA靶点序列5’和3’端设计两个酶切位点序列Eco RⅠ和NheⅠ（表1）。将合成好的sgRNA核苷酸序列进行程序退火，使其形成双链。