《表1 PCR引物序列信息》

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《腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1反向遗传系统的建立》

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注:粗体表示保护碱基；下划线表示限制性酶切位点。

以pT7-MCS3-F1质粒为模板，pCDIBP-MuVNP-NheⅠ、pCDIBP-MuVNP-NotⅠ为引物，扩增NP基因，经NheⅠ/NotⅠ酶切位点克隆至pCDIBP载体中，获得辅助质粒pCDIBP-MuVJL1-NP。L基因分L1和F567片段分别进行构建，以pT7-MCS3-F4质粒为模板，pCDIBP-MuVL1-NheⅠ、pCDIBP-MuVL1-XhoⅠ为引物扩增L1基因片段，经NheⅠ/XhoⅠ酶切位点克隆至pCDIBP载体，获得质粒pCDIBP-MuVJL1-L1；再将pT7-MCS3-F567中F567片段经XhoⅠ/NotⅠ双酶切后克隆至质粒p CDIBP-MuVJL1-L1，获得辅助质粒pCDIBP-MuVJL1-L。MuV V/P基因完整转录后m RNA编码V蛋白，插入2个非模板的G残基编码P蛋白[9]。MuV的P基因序列由苏州金唯智生物科技有限公司合成，将合成基因通过NheⅠ/NotⅠ酶切位点克隆至载体pCDIBP，获得辅助质粒pCDIBP-MuVJL1-P。NheⅠ/NotⅠ酶切鉴定辅助质粒pCDIBP-MuVJL1-NP、pCDIBP-MuVJL1-P、pCDIBP-MuVJL1-L。辅助质粒构建用PCR引物序列信息见表1。