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第一篇 生化技术概述1

第一章 吸光光度法1

一、原理1

二、光电比色法4

三、分光光度法6

四、计算12

五、荧光分析法12

第二章 层析法17

一、吸附层析17

二、分配层析19

三、离子交换层析20

四、凝胶层析22

五、亲和层析24

第三章 电泳法25

一、原理25

二、影响电泳的主要因素26

三、区带电泳的分类27

四、几种电泳简介28

第四章 离心法32

一、分级离心法32

二、密度梯度离心法33

三、电动离心机的使用34

附：离心机转速与离心力的换算36

第五章 放射性同位素技术37

一、基本知识37

二、射线的探测40

三、放射性同位素的优缺点42

第六章 生物大分子实验技术43

一、盐析43

二、透析和超滤45

三、减压浓缩和冷冻干燥46

第七章 生化实验样品的制备48

一、血液样品48

三、组织样品49

二、尿液样品49

第八章 基本技能训练51

一、玻璃仪器的洗涤51

二、常用仪器的使用52

三、容量仪器的校正57

第九章 数据处理与实验报告62

一、实验误差与数据处理62

二、产生误差的原因和校正64

三、实验报告书写65

第二篇 生物化学实验66

蛋白质66

实验一 蛋白质的变性与沉淀66

一、蛋白质的盐析67

二、重金属盐及某些酸类沉淀蛋白质68

三、加热沉淀蛋白质69

四、乙醇沉淀蛋白质70

实验二 蛋白质含量的Folin-酚法测定72

附注：蛋白质的定量分析74

实验三 微量凯氏(Kjeldahl)定氮法75

实验四 血清蛋白质的定量81

一、总蛋白测定(双缩脲法)81

二、血清蛋白溴甲酚绿比色测定法84

三、血清球蛋白乙醛酸比色测定法85

实验五 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳87

实验六 血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳89

附：聚丙烯酰胺电泳快速分离人血清蛋白质93

核酸96

实验七 细胞核的分离与核酸的检定96

一、细胞核的分离与纯化96

二、核糖核酸的测定98

三、脱氧核糖核酸的测定100

实验八 动物肝DNA的提取和定量103

实验九 酵母RNA的分离及组分鉴定106

附注：测定组织核酸含量的方法简评108

实验十 3H胸苷参入核酸的实验109

酶111

实验十一 温度对酶促反应速度的影响111

附注：不同温度条件下体液酶的稳定性112

实验十二 PH对酶促反应速度的影响113

实验十三 激动剂及抑制剂对酶活性的影响114

附注：酶的激动剂与抑制剂115

实验十四 可逆性抑制剂对酶促反应速度的影响116

实验十五 蔗糖酶的专一性120

实验十六 过氧化氢酶米氏常数的测定122

附注：米氏常数的意义及应用124

实验十七 血清乳酸脱氢酶同工酶的测定126

实验十八 血清谷丙转氨酶的活性测定(改良Mohun法)128

附注：1.酶活力的意义及测定方法130

2.测定血清谷丙转氨酶活性方法简介131

实验十九 碱性磷酸酶的提取及比活性测定132

附注：酶的提取及纯化应注意的问题136

实验二十 精氨酸酶的作用138

糖140

实验二十一 糖的滤纸层析140

附注：层析用滤纸和溶剂选择141

实验二十二 肝糖元的提取和定量142

附注：饱食与饥饿对肝糖原含量的影响144

实验二十三 血糖浓度测定146

一、血清葡萄糖邻甲苯胺(O-TB)法测定146

二、血清葡萄糖氧化酶(GOD)法测定147

脂类151

实验二十四 血清甘油三酯测定151

一、分溶抽提乙酰丙酮显色法151

二、酶法测定(一步终点比色法)153

实验二十五 血清总胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇含量的测定(酶法)155

附注：血清胆固醇含量测定方法的简评156

实验二十六 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳158

附注：血清脂质及脂蛋白测定的临床意义159

实验二十七 肝脏的生酮作用161

生物氧化163

实验二十八 乳酸脱氢酶及其辅酶163

附注：酶蛋白与小分子物质的分离方法164

实验二十九 细胞色素氧化酶的作用及其抑制与解毒165

维生素167

实验三十 胡萝卜素的色层分析167

实验三十一 维生素B1的定性(荧光法)169

实验三十二 还原型维生素C的定量测定及其影响因素170

附注：测定维生素C的方法比较172

其它173

实验三十三 血清尿素氮(BUN)测定173

一、二乙酰-肟显色法173

二、脲酶-波氏比色法174

实验三十四 血浆二氧化碳结合力(CO2CP)测定176

附注：CO2CP的测定方法简述177

实验三十五 血清钾钠测定-火焰光度法178

附注：火焰光度法基本原理181

实验三十六 尿中异常成分的定性184

一、尿中酮体的定性测定(Lange法)184

二、尿糖的定性测定(班氏试剂法)185

三、尿蛋白定性(磺基水杨酸法)187

附注：正常人尿液成分188

附录189

1.常用缓冲液的配制方法189

2.常用酸碱指示剂193

3.化学试剂纯度分级表195

4.实验室常用酸碱比重和浓度195

5.元素原子量表196

6.哺乳类实验动物的血清生化值197

7.几种食物中一般营养成分表(可食部分每百克中的含量)198

8.生化实验须知200

9.仪器使用管理制度及实验仪器单201