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目录1

概述1

生物化学实验的特点1

生物化学实验须知及安全措施1

生物化学实验报告的书写2

生物化学实验基础4

实验一 生物化学实验的基本操作4

一、基本操作4

二、721分光光度计的使用7

三、硫酸铜标准曲线的制作7

蛋白质化学9

常用蛋白质实验方法的基本原理9

一、盐析9

二、透析9

三、层析10

四、电泳13

实验部分15

实验二 蛋白质的定性试验——沉淀反应15

一、盐析法15

二、乙醇沉淀法16

三、重金属盐沉淀法16

四、无机酸和有机酸沉淀法17

五、蛋白质的两性反应——酪蛋白的等电点测定17

实验三 蛋白质的定量测定19

一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法19

二、双缩脲法21

三、Folin-酚试剂法22

四、改良Lowry氏法24

五、考马斯亮蓝法26

六、紫外吸收法28

实验四 血清蛋白质的乙酸纤维素薄膜电泳30

实验五 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质31

实验六 血清γ-球蛋白的分离与纯化35

实验七 分子筛凝胶层析法测定蛋白质分子量39

实验八 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量41

酶学44

实验九 酶的特异性和高效性44

一、酶的特异性44

二、酶的高效性45

实验十 影响酶促反应速度的因素45

一、温度对酶促反应速度的影响45

二、pH对酶促反应速度的影响46

三、激动剂和抑制剂对酶促反应速度的影响47

实验十一 酶的米氏常数（Km）测定47

一、蔗糖酶的Km测定48

二、碱性磷酸酶的Km测定52

三、脲酶的Km测定54

实验十二 胃蛋白酶原的激活56

实验十三 乳酸脱氢酶及其辅酶的作用57

维生素的测定59

实验十四 食物中胡萝卜素的柱层析分离59

实验十五 食物中维生素C含量的测定60

糖代谢63

实验十六 糖的硅胶G薄层层析分离63

实验十七 红细胞中的糖酵解作用65

实验十八 运动对肌肉组织糖酵解的影响67

实验十九 血糖测定及激素对血糖水平的影响68

一、肾上腺素和胰岛素对血糖水平的影响68

二、血糖测定（Folin-吴法）69

三、血糖测定（邻甲苯胺法）71

四、血糖测定（葡萄糖氧化酶法）72

附：尿糖定性试验75

实验二十 糖原测定——饱食和饥饿对小鼠肝糖原含量的影响76

一、聚丙烯酰胺凝胶电泳法78

实验二十一 血清乳酸脱氢酶同工酶的电泳分离78

二、琼脂糖电泳法82

脂代谢84

实验二十二 血清甘油三酯含量的测定（乙酰丙酮法）84

实验二十三 血清总胆固醇含量的测定86

一、乙酸酐-硫酸显色法86

二、邻苯二甲醛直接显色法87

三、胆固醇氧化酶法88

实验二十四 血清脂蛋白琼脂糖电泳90

实验二十五 血清高密度脂蛋白的分离及其胆固醇含量的测定92

实验二十六 单向免疫扩散法测定人血清中apoAl和apoB的含量93

实验二十七 酮体的生成和氧化94

实验二十八 卵黄中脂质的提取及其成分的鉴定95

实验二十九 去污剂对红细胞膜稳定性的影响97

实验三十 血清过氧化脂质的测定98

实验三十一 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用100

生物氧化100

实验三十二 细胞色素体系的氧化作用及CN-的抑制作用101

氨基酸的代谢103

实验三十三 氨基移换作用103

实验三十四 精氨酸酶在尿素生成中的作用104

一、扩散皿法104

二、纸片法106

核酸的化学107

实验三十五 核酸的增色效应107

实验三十六 肝中核酸的分离与鉴定107

肝脏生化113

实验三十七 血清黄疸指数测定113

实验三十八 血清胆红素定性试验及定量测定114

一、血清胆红素定性试验（Vandenbergh试验）114

二、血清总胆红素及一分钟胆红素定量测定116

实验三十九 血清清蛋白及球蛋白含量的测定117

实验四十 血清谷丙转氨酶活力测定（改良穆氏法）119

实验四十一 血清尿素氮测定（二乙酰一肟法）122

血液生化122

实验四十二 血清肌酐测定（碱性苦味酸盐法）123

水盐代谢及酸碱平衡126

实验四十三 血清钾、钠含量测定126

一、火焰光度法测定血清钾、钠含量126

二、四苯硼钠法测定血钾含量128

实验四十四 血钙含量测定130

一、EDTA直接滴定法130

二、核固红比色测定法131

附：家兔低血钙的观察132

实验四十五 血浆二氧化碳结合力的测定133

一、范氏（VanSlyke）气量法133

二、酸碱滴定法136

三、安医大式简易气量法138

附录一 常用生化正常值140

附录140

附录二 部分复杂试剂的配制方法142

附录三 常用缓冲液的配制146

附录四 常用抗凝剂的配制155

附录五 常用标本的制备155

附录六 滤光片的选用157

附录七 硫酸铵饱和浓度表157

附录八 常用摩尔溶液的配制157

附录九 乙醇稀释表158

附录十 常用蛋白质分子量参考值159

附录十一 法定计量单位160

附录十二 离心机转数与相对离心力的换算161

附录十三 常用生化单位换算表161

附录十四 化学试剂纯度分级表165

附录十五 常用元素的原子量表165