《生物化学实验》

目录1

实验须知1

蛋白质和核酸化学1

实验1蛋白质等电点的测定3

实验2蛋白质的沉淀反应（盐析、有机溶剂、重金属、生物碱试剂）4

实验3血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳9

实验4聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测定牛血清白蛋白等电点16

实验5凝胶层析分离蛋白质18

一、血红蛋白和鱼精蛋白的分离18

二、脲酶的分离19

实验6氨基酸的薄层层析33

实验7DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白质34

实验8血清γ-球蛋白提纯与纯度鉴定37

实验9血红蛋白及其衍生物的吸收光谱测定38

实验10蛋白质定量46

一、微量凯氏（Kieldahl）定氮法46

二、比色法46

三、紫外分光光度法46

实验11牛胰核糖核酸酶的变性及复性51

四、核酸的测定酶56

三、DNA、RNA的碱基分离56

一、肝细胞浆、核的分离与鉴定56

二、DNA、RNA的提取56

实验12肝细胞核酸提取、鉴定和测定56

实验13蔗糖酶的专一性71

实验14影响酶活性的因素72

一、温度对酶活性的影响附注：关于酶的最适温度的讨论72

二、pH对酶活性的影响附注：酶的最适pH72

三、激动剂和抑制剂对酶活性的影响72

附注：米氏常数的意义及应用80

二、过氧化氢酶的Km值测定80

一、胰蛋白酶的Km值测定80

实验15酶的米氏常数（Km）测定80

实验16乳酸脱氢酶的组分及作用87

实验17乳酸脱氢酶同工酶（聚丙烯酰胺凝胶）电泳90

实验18胡萝卜素的色层分析94

实验19维生素C的定量（2,4-二硝基苯肼法）95

实验21肝糖元的提取、鉴定与定量102

一、肝糖元的提取与鉴定102

二、肝糖元定量测定102

实验22饱食、饥饿和激素对肝糖元含量的影响104

二、邻-甲苯胺法105

实验23血糖测定105

一、吴宪-Fo1in法105

实验24胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响110

实验25运动对血中乳酸含量的影响111

实验26血清脂蛋白的电泳112

一、血清脂蛋白的醋酸纤维薄膜电泳112

二、血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳112

三、血清脂蛋白聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳112

实验27转氨基作用（圆形纸层析法）116

实验28精氨酸酶的作用118

实验29细胞色素氧化酶的作用及其抑制与解毒120

实验30Warburg氏呼吸计测压法121

一、肝组织耗氧量的测定121

二、谷氨酸含量的测定121

实验31放射性同位素示踪132

一、3H-胸苷掺入DNA的试验132

二、32P掺入磷脂的试验附注放射性同位素技术临床生化132

实验32血清总胆固醇的测定140

实验33血清三酸甘油酯的测定（抽提法）142

三、改良穆氏法144

二、赖氏法144

实验34血清谷丙转氨酶活性测定144

一、金氏法144

实验35全血非蛋白氮（NPN）测定149

一、消化法149

二、改良帕波特Rappoport氏滴定法149

实验36血清钾钠测定（火焰光度法）154

实验37血清钾的测定（四苯硼钠比浊法）159

实验38血清钙的测定161

一、草酸盐-高锰酸钾滴定法161

二、乙二胺四乙酸二钠滴定法161

二、滴定法164

实验39血浆二氧化碳结合力的测定164

一、量积法164

实验40尿淀粉酶活性的测定（Winslow氏法）170

实验设计172

生化实验中的对照设置172

附录Ⅰ常用缓冲液及酸碱指示剂的配制方法174

附录Ⅱ电动离心机的使用178

附录Ⅲ常用容量仪器的规格、使用、清洗及洗液的配制181

附录Ⅳ几种动物生化常数表189

主要参考书目190