《生物化学实验讲义》

第一部分生物化学实验基本技术及原理1

第一章实验样品的制备1

一、血液1

二、尿液1

三、组织1

第二章几种常用的生物大分子实验技术3

一、盐析技术3

二、透析和超滤5

三、减压浓缩和冷冻干燥6

第三章分光光度法及比色分析法9

一、原理9

二、仪器的基本结构10

三、几种常用的国产仪器的使用方法13

第四章层析技术16

一、吸附层析16

二、分配层析17

三、离子交换层析19

四、凝胶过滤22

五、亲和层析24

第五章电泳技术26

一、原理26

二、纸上电泳和醋酸纤维素薄膜电泳29

三、琼脂及琼脂糖凝胶电泳30

四、聚丙烯酰胺凝胶电泳31

第六章酶联免疫吸附测定技术35

一、原理35

二、试剂与器材39

三、操作方法40

四、注意事项41

第七章放射性同位素基本技术42

一、放射免疫分析基本技术42

二、放射受体分析46

三、放射自显影技术49

四、放射性同位素示踪技术51

第二部分实验53

实验一 蛋白质的颜色反应53

实验二 微量凯氏定氮法55

实验三 测定蛋白质的比色分析法58

实验四 紫外分光光度法测定蛋白质60

实验五 血红蛋白的吸收光谱62

实验六 血清γ—球蛋白提纯63

实验七 DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白质66

实验八 胡罗卜素的吸附层析法68

实验九 醋酸纤维素薄膜电泳70

实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳73

实验十一 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳79

实验十二 食物中维生素C含量测定81

实验十三 酶促反应动力学实验83

实验十四 牛血铜锌超氧化物歧化酶分离提纯与活性测定86

实验十五 组织过氧化脂质定量测定90

实验十六 肝精氨酸酶活性测定92

实验十七 肝脏谷丙转氨酶活性测定95

实验十八 血清葡萄糖含量测定98

实验十九 血浆CO2含量测定101

实验二十 钙的测定103

实验二十一 血清尿素氮测定105

实验二十二 质粒DNA提取、酶切与鉴定107

实验二十三 动物肝脏RNA的制备和测定115

实验二十四 DNA的测定118

实验二十五 聚合酶链反应（PCR）实验技术120

第三部分附录122

一、实验室安全及防护知识122

二、试剂分级及注意事项124

三、常用缓冲溶液的配制125

四、单位与浓度的表示及溶液浓度的调整132

五、实验室常用蛋白质分子量及等电点参考值139

六、实验室常用层析材料数据表143

七、常用限制性内切酶的有关资料148

八、实验误差与数据处理150