《生物化学实验》

目 录1

一、糖化学1

1．总糖和还原糖测定（一）——3,5－二硝基水杨酸法1

2．总糖和还原糖测定（二）——斐林氏法4

3．总糖和还原糖测定（三）——碱性铜试剂法9

4．糖的硅胶G薄层层析12

5．糖的聚酰胺薄膜层析15

二、脂肪化学19

6．脂肪皂化值测定19

7．脂肪碘值测定21

8．脂肪酸值测定23

9．油料作物脂肪抽提和含量测定25

三、有机酸化学27

10．柠檬酸的提取——离子交换树脂法27

四、蛋白质化学33

11．人发中提取胱氨酸33

12．面粉中赖氨酸含量测定35

13．氨基酸双向纸层析39

14．氨基酸纤维素薄层层析43

15．缓冲液的性质45

16．蛋白质的电荷49

17．蛋白质等电点测定51

18．总氮测定（一）——常量克氏定氮法53

19．总氮测定（二）——微量克氏定氮法56

20．氨基氮测定——甲醛滴定法61

21．蛋白质浓度测定（一）——福林－酚试剂法64

22．蛋白质浓度测定（二）——染色测定法66

23．血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳69

24．胎儿甲种球蛋白对流免疫电泳73

25．血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳76

26．血清脂蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳83

27．蛋白质N－末端测定86

28．珠蛋白的制备及其N－末端测定94

29．葡聚糖凝胶层析特性98

30．蛋白质分子量测定（一）——SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法104

31蛋白质分子量测定（二）——葡聚糖凝胶过滤法110

五、核酸化学117

32．生物材料中总磷量测定——比色法117

33．核糖核酸定量测定——改良苔黑酚法120

34．脱氧核糖核酸定量测定——改良二苯胺法124

35．紫外吸收法测定核酸及核苷酸含量127

36．动物组织细胞内核酸（DNA与RNA）含量测定133

Ⅰ．肝脏组织中DNA和RNA的分离133

Ⅱ．肝脏组织中DNA和RNA含量测定136

37．动物肝脏组织中核糖核酸的提取140

38．脱氧核糖核酸（DNA）的提取142

Ⅰ．动物组织中DNA的提取142

Ⅱ．细菌中DNA的提取145

Ⅰ．酵母核糖核酸的提制149

39．从酵母中制备5′－核苷酸149

Ⅱ．核糖核酸的酶解153

Ⅲ．5′－核苷酸定量测定——过碘酸氧化法156

Ⅳ．单核苷酸的离子交换柱层析分离159

Ⅴ．单核苷酸的纸电泳法鉴定166

40．脱氧核糖核酸的碱基组成及其含量测定169

41．DEAE－纤维素薄层层析——核苷及核苷酸的分离；172

AMP、ADP及ATP的分离172

42．核糖核酸碱水解产物的琼脂糖电泳鉴定175

43．ECORI酶解λ噬菌体DNA片段的电泳分离178

44．酶在生物组织中的分布和某些因素对酶的影响182

六、酶182

45．1398中性蛋白酶活力测定186

46．脂肪酶活力测定190

47．蔗糖酶的纯化和比活力测定193

48．蔗糖酶进程曲线的制作及不同酶浓度对反应速度的199

影响199

49．蔗糖酶的米氏常数Km和最适pH测定204

50．α－半乳糖苷酶酶学性质测定211

Ⅰ．进程曲线的制作211

ⅡpH对酶活性的影响及酸碱稳定性测定214

Ⅲ．温度对酶活性的影响及热稳定性测定217

Ⅳ．米氏常数测定220

Ⅴ．抑制剂类型的判断及抑制常数Ki测定226

51．用正交试验设计法测定几种因素对溶菌酶活性的影响234

52．酶的超过滤浓缩244

53．固相5′－磷酸二酯酶的制备249

七、代谢256

54．发酵过程中无机磷的利用256

55．糖酵解中间产物的鉴定257

56．脱氢酶活性测定260

57．脂肪酸β－氧化262

58．氨基移换反应266

2．标准溶液的制备相标定270

1．市售浓酸和氨水的比重和浓度270

八、附录270

3．一些层析滤纸的规格与性能273

4．各种离子交换树脂类似商品对照表274

5．国产离子交换树脂的物理常数276

6．葡聚糖凝胶Sephadex的物理性质281

7．常用参考蛋白质的分子量282

8．常用核酸类物质常数表284

9．酸碱指示剂292

10．缓冲液配制方法293

11．pH计测溶液pH的原理和步骤309

12．分光光度法313

九、参考文献323