《生化实验讲义》

生化实验须知1

附：实验：基本操作训练2

第一篇：生化实验常用技术6

一、紫外和可见分光光度法6

（一）基本原理7

（二）光吸收的测定10

（三）分光光度计的结构13

（四）分光光度法的应用15

二、层析技术19

（一）概述20

（二）离子交换柱层析22

（三）薄层层析27

（四）亲和层析29

三、凝胶过滤32

四、电泳技术40

（一）基本原理41

（二）滤纸电泳（又称纸上电泳）44

（三）聚丙烯酰胺凝胶电泳45

（四）凝胶等电聚焦49

五、超离心技术51

六、放射性同位素技术56

七、放射免疫测定法65

八、常用生化仪器的使用方法：69

（一）酸度计69

（二）721分光光度计的构造及使用73

（三）751 G型分光光度计的构造和使用74

（四）ZBS-1型自动部分收集器76

（五）恒流泵78

（六）电泳光密度扫描仪78

（七）氮基酸自动分析仪简介82

第二篇生化实验85

一、蛋白质：85

实验一：蛋白质的呈色反应85

实验二：蛋白质的沉淀与变性89

实验三：血清总蛋白的定量测定94

（一）微量凯氏定氮法94

（二）紫外分光光度法98

（三）福林—酚试剂法99

（四）电位滴定法——用氨气敏电极测定血清中蛋白质。100

二、核酸化学：103

实验四：肝脏RNA的提取（苯酚法）104

实验五：酵母RNA的提取（浓盐法）105

实验六：肝脏DNA的提取（氯仿—异戊醇法）106

实验七：核酸含量、纯度及成分？定108

三、酶的动力学：113

实验八：底物浓度对酶活性的影响113

实验九：抑制剂对酶促反应速度的影响116

实验十：温度、PH对酶促反应速度的影响119

四、分光光度法：122

实验十一：血红蛋白及其衍生物的吸收光谱及定量测定122

实验十二：氨基酸纸上层析及氨基移换作用129

实验十三：氨基酸离子交换？层析分离混合氨基酸132

实验十四：凝胶过滤分离蛋白质137

实验十五：凝胶过滤分离高铁血红蛋白及高铁氰化钾141

六、电泳法：143

实验十六：血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳143

实验十七：血红蛋白肽链裂解电泳144

实验十八：血清蛋白和脂蛋白的醋酸纤维薄膜电泳145

实验十九：利用醋纤电泳测定血清乳酸脱氢酶同工酶活性150

实验二十：聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质152

实验二十一：凝胶等电聚焦分离血清蛋白质163

七、与临床生化有关的实验：166

实验廿二：全血葡萄糖糖含量测定166

实验廿三：血清胆固醇测定168

实验廿四：全血非蛋白氮含量测定170

实验廿五：血清谷丙转氨酶（S—GPT）活性测定172

实验廿五：血清钙测定174

实验廿七：血浆CO2CP测定（量气法）177

附录：181

（一）国际原子量表181

（二）酸硷指示剂184

（三）缓冲液配制185

（四）常用酸碱浓度186

（五）四位对数表187