《表1 44个自噬相关基因的引物序列 (人源)》

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《氧化应激诱导的自噬与隐睾症及畸形精子症的相关性研究》


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qPCR array是运用高通量荧光定量PCR进行差异表达基因筛选的技术。在本实验中,将逆转录好的cDNA分批次进行96孔qPCR array实验,检测44种自噬相关基因在隐睾症患者睾丸组织和正常睾丸组织中的表达差异。以人源管家基因β-actin为内参,sense:5′GCACCACACCT-TCTACAATGAG3′;antisense:5′ACAGCCTGGAT-GGCTACGT3′。使用Primer Premier 5.0设计引物,所有基因引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,各自噬相关基因引物序列如表1所示。反应体系如下:AceQ誖SYBR誖Green Master Mix(Low ROX Premixed)5μL;正向引物(10μmol/L)0.2μL;反向引物(10μmol/L)0.2μL;模版cDNA 1μL;灭菌水3.6μL。反应程序设置:95℃5 min;95℃5 s,60℃30 s;95℃15 s,60℃60 s,95℃15 s。实验结果利用MxPro QPCR、Minitab 17软件进行分析。