《表1 扩增孵化相关基因的引物序列》

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《家蚕卵形指数对孵化率的影响及孵化相关基因表达分析》

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以肌动蛋白3(Actin3）为内参基因，比较蚕卵胚胎后期孵化相关基因（Bm HE I、Bm HE II、Chitinase和Period）的表达差异。所用引物及其序列信息见表1，均委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。以Nistari+和Nistari-蚕卵催青第7、8、9和10 d（蚕卵胚胎发育后期）的散卵各100 mg为材料，按TRIzol试剂盒说明提取总RNA，获得的蚕卵总RNA用适量DEPC水溶解，并稀释至500 ng/μL。取1μg RNA反转录合成c DNA第一链，具体步骤按照First Strand c DNA Synthesis Kit试剂盒（Ta Ka Ra公司）说明进行操作。以c DNA为模板进行实时荧光定量PCR检测，反应体系50.0μL:2×Ultra SYBR Mixture 25.0μL，上、下游引物（10μmol/L）各1.0μL，c DNA模板2.0μL，dd H2O补足至50.0μL。扩增程序：95℃预变性2 min；95℃15 s，59℃30 s，72℃30 s，进行30个循环。