《表1 基因扩增引物序列：补肾益精汤对弱精症大鼠精子线粒体功能的影响及其相关机制研究》

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《补肾益精汤对弱精症大鼠精子线粒体功能的影响及其相关机制研究》

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摘取大鼠附睾置于清洁培养皿中，加入2 m L 37℃生理盐水，用无菌剪刀将附睾剪成碎块后，移入试管中，用Percoll分离法优化精子备用。取同等体积的优化精液8μL放置于载玻片，进行精液常规精子运动轨迹分析。线粒体的分离、细胞线粒体呼吸控制率（RCR）测定、ATP含量测定均严格按照所购买的试剂盒说明书严格操作。应用RT-PCR技术测定Cat Sper1RNA含量，操作严格按照RT-PCR试剂盒操作。具体如下：（1）精子总RNA制备。（2）引物设计。PCR扩增引物由上海生物工程有限公司设计并合成。见表1。（3）逆转录合成。反应条件：Cat Sper 1反应：依次进行：94℃、1 min，94℃、30 s，55℃、30 s，72℃、45 s，36个循环，72℃、10 min。GAPDH反应：94℃、1 min，94℃、30 s，57℃、30 s，72℃、45 s，34个循环，72℃、10 min。（4）电泳及结果分析：载体：2%琼脂糖凝胶，1×TAE电泳缓冲液。PCR产物4.0μL与10×载体样缓冲液1.0μL混匀，点样，80 V稳压电泳45 min，在凝胶成像仪上观察、拍照。应用Quantity One软件进行半定量分析。