《表1 PCR引物序列:补肾化痰方对去势骨质疏松模型大鼠Th17/Treg平衡机制的影响》

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《补肾化痰方对去势骨质疏松模型大鼠Th17/Treg平衡机制的影响》


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PCR检测大鼠骨组织中Foxp3,RORγt m RNA表达采用trizol法提取RNA,将总RNA转录成c DNA,反应条件为25℃5 min,50℃15 min,85℃5 min,4℃10 min。再将c DNA做4倍稀释进行Real-time PCR检测,c DNA 4μL,100μmol·L-1的上游引物与下游引物各0.4μL,SYBR Green/Master Mix 10μL,H2O 5.2μL,共20μL。反应条件为50℃2 min,95℃10 min,95℃30 s,60℃30 s,40个循环,绘制溶解曲线,最终数据以2-ΔΔCt进行分析。引物由武汉巴菲尔生物技术服务公司设计及提供,其引物序列及产物大小见表1。