《表1 引物序列:长期铜暴露诱导大鼠睾丸发生自噬的研究》

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《长期铜暴露诱导大鼠睾丸发生自噬的研究》


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qRT-PCR检测LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、ATG5、和Beclin1 m RNA的相对表达水平。按照诺唯赞试剂盒说明书提取总RNA。使用Thermo Fisher科技公司的微量核酸测定仪检测RNA的总浓度和纯度。内参基因为管家基因GAPDH。使用Primer 3.0软件设计引物序列,引物序列如表1所示,引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。按诺唯赞试剂盒说明书进行RNA反转录。将反转后得到的c DNA作为模板进行qRT-PCR反应。反应体系为:c DNA 1L,2×ChamQ SYBR qPCR Master Mix 5L,无酶水3.2L,上下游引物各0.4L。反应条件为:95℃预变性5 min;95℃30 s,60℃30 s。