《表1.引物序列:糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用》

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《糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用》


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从主动脉组织中提取蛋白,用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。取40μg蛋白上样到SDS-聚丙烯酰胺凝胶进行电泳,将蛋白条带转印到PVDF膜上,用5%脱脂奶粉室温封闭3 h,加入一抗Beclin1(1∶2000)、LC3(1∶2000)、p62(1∶1000)、CHOP(1∶2000),Caspase-12(1∶1000)、GRP78(1∶2000)和GAPDH(1∶2000)(均购自Abcam公司) ,于4℃摇床过夜。加入二抗(1∶5000稀释,购自博士德生物工程有限公司),室温孵育2 h。加入增强化学显影剂(ECL)显影,凝胶自动成像仪扫描图像,Image Lab软件对条带进行定量分析。