《表1 各引物序列信息：IGF-1上调miR-155表达对新生大鼠缺氧性肺动脉高压肺组织损伤的影响及其作用机制》

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《IGF-1上调miR-155表达对新生大鼠缺氧性肺动脉高压肺组织损伤的影响及其作用机制》

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取出大鼠肺部组织研磨，加入1 m L TRIzol裂解液，室温静置5 min，加入200μL氯仿混匀，室温放置10 min。离心取上层，加入等体积异丙醇于RNase-free的1.5 m L离心管中，冰浴30 min，在4℃，12 000 r/min离心15 min，得到RNA沉淀，空气干燥RNA。加入50μL RNase-free的水溶解RNA；利用NanoDrop测定总抽提RNA，置于-20℃，备用。根据TaqManMicroRNA Reverse Transcription kit试剂盒操作说明书，cDNA产物由抽提的RNA体外反转录实验得到；在16℃中孵化需要30 min；在42℃中孵化需要30 min；85℃加热5 min，4℃保存。通过得到的c DNA进行PCR荧光定量检测，在LightCycler480仪器上操作，以U6为内参，miR-155的相对表达用ΔCT来表示，95℃，预变性10 min，95℃15 s，60℃30 s，70℃30 s，共40个扩增周期，ΔCT=CTU6-CTmiR-155计算miR-155 mRNA的相对表达，引物信息见表1。