《表1 各引物序列信息：microRNA-1285-3p在脓毒症急性肺损伤中的表达及其与炎症因子水平的相关性》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《microRNA-1285-3p在脓毒症急性肺损伤中的表达及其与炎症因子水平的相关性》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

1）组织中RNA提取：由液氮中取出大鼠部分肺组织切片，进行充分研磨后，于EP管中将含有1 ml Trizol裂解液加入，充分摇匀；室温5 min静置，将氯仿加入200μl，之后混匀充分，10 min室温放置；而后4℃，12 000 r/min离心15 min。于RNasefree离心管（1.5 ml）内取上层水相，放置于冰上30 min前需添加等体积异丙醇后混匀震荡。取出离心管，然后再次于4℃，12 000 r/min离心15 min，得到RNA沉淀。将RNA沉淀采用75%的酒精500μl洗涤2次后，室温下自然风干沉淀；RNA采用RNase-free水50μl室温溶解，置于-80℃冰箱备用，应用NanoDrop对RNA行浓度和纯度检测。2）定量检测PCR：根据ABI公司的试剂盒TaqMan?RNA Reverse Transcription kit说明书操作，通过体外反转录实验抽提的RNA，得到产物cDNA；反应条件：16℃孵育30 min，42℃30 min孵育，85℃孵育5 min，保存4℃。采用反应体系TaqMan?Universal PCR Master Mix 20μl，将得到的cDNA为模板，进行PCR荧光定量，检测内参参照β-actin，操作采用罗氏LightCycler480仪器进行。?CT=|CTU6-CTmicroRNA-1285-3p|，其中?CT表示microRNA-1285-3p的相对表达，反应条件为：95℃，10 min预变性；70℃30 s，95℃15 s，55℃30 s，进行循环扩增40个，采用同样的方法对TNF-α以及IL-6的表达进检测。引物信息见表1。