《表1 PCR引物序列：二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织GATA3,T-bet mRNA表达的影响》

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《"二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织GATA3,T-bet mRNA表达的影响"》

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于-80℃冰箱中取出新鲜的冰冻组织，质量约100 mg，加入trizol试剂1 m L，并研磨成浆，再移至1.5 m L离心管内裂解。加入三氯甲烷200μL，剧烈混匀颠倒数次后，室温下静置5 min。4℃，12 000 r·min-1离心15 min，可见形成三相。转移上层入一新1.5 m L离心管内，加异丙醇400μL，10 min室温静置。4℃，12 000 r·min-1离心10 min，管底可见RNA的白色沉淀。弃上清，加75%乙醇1 m L，涡旋混匀后，4℃，1万r·min-1，离心5 min。弃上清，空气中干燥RNA沉淀5～10 min，将沉淀溶于DEPC水20μL中。计算RNA纯度、浓度。根据吸光度A260 nm/A280 nm，估测RNA的质量。根据A按下列公式计算样品RNA的浓度:总RNA浓度（g·L-1）=A260 nm×40×10-3。将总RNA放于-80℃冰箱内保存以备用。根据A计算样品RNA的浓度。甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参，引物序列见表1。逆转录成c DNA，反应条件为25℃5 min，50℃15 min，85℃5 min，4℃10 min。Real-time PCR检测，cDNA做10倍稀释，反应条件为50℃2 min，95℃10 min；95℃30 s，60℃30 s，40循环。绘制熔解曲线，最终数据以2-ΔΔCt进行分析。