《表2 PCR引物序列：加味黑布膏对大鼠痤疮模型组织TLR2、TLR4表达的影响及其作用机制探讨》

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《加味黑布膏对大鼠痤疮模型组织TLR2、TLR4表达的影响及其作用机制探讨》

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注：将β-actin作为内参基因，以空白组为对照。计算基因的表达量F=2-ΔΔCt及标准差。ΔΔCt=（实验组目的基因Ct值-实验组内参基因Ct值）-（对照组目的基因Ct值-对照组内参基因Ct值）。

取大鼠耳组织约100mg，液氮研磨后转移至电动匀浆器中进一步研磨。将处理后的样品在室温放置5min，向匀浆样品中加0.2m L氯仿，剧烈震荡15s，室温放置3～5min。4℃12 000r/min离心10min。将水相转移到新管中，加入0.5m L异丙醇，室温放置5min，4℃12 000r/min离心15min，弃上清液。加入1m L 75%乙醇洗涤沉淀，7 500r/min离心5min，弃上清液。室温通风放置10min，加入15μL无酶水。经Thermo-NANO仪器测定样品的纯度及浓度。根据反转录试剂盒说明书，将1μg RNA进行反转录从而合成c DNA。首先去除基因组DNA，体系为：step1:RNA 1μg，5×g DNase Eraser buffer 2μL，g DNase Eraser 2μL，DEPC-treated water up to 10μL。42℃反应2min。反转录体系为：Reaction solution from step1 10μL，5×Prime Script Buffer 2（for Real Time）4μL，Prime Script RT Enzyme Mix I 1μL，RT Primer Mix 1μL，RNase Free d H2O 4μL，反应程序为：37℃15min，85℃5s。取各组等量c DNA进行TLR2及TLR4 PCR扩增实验，设定程序为Step1:95℃30s；Step2:95℃5s，60℃30s，GOTO 39或43个循环。各基因引物序列见表2。