《表1 PCR引物序列:鼠李糖乳杆菌对斑马鱼脊髓损伤后肠道炎症的抑制作用及其机制》

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《鼠李糖乳杆菌对斑马鱼脊髓损伤后肠道炎症的抑制作用及其机制》


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实验结束后,取各组斑马鱼肠道组织,按照Biomiga EZgeneTM Tissue RNA Kit的说明提取肠道总RNA并测定浓度,然后按PrimeScript TM RT Master Mix进行反转录,得到cDNA,以该cDNA为模板,按表1中的引物序列合成相应引物,使用SYBR Premix Ex TaqTMⅡ进行RT-qPCR反应。PCR反应条件:95℃、1min;95℃、15s,55℃、15s,72℃、45s,共40个循环。采用2-ΔΔCt法计算斑马鱼肠道组织中肠道屏障相关分子[β防御素样肽-1(defensin beta-like 1,DEFBL1)、紧密连接蛋白2a(tight junction protein 2a,TJP2a)、黏液素2.1(mucin 2.1,MUC2.1)和黏液素5.3(mucin 5.3,MUC5.3)]和炎症相关分子[肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR-2)及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)]mRNA表达水平。