《表1 引物序列:厚朴酚衍生物CT2-3对结肠癌细胞的抑制作用及其机制》

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《厚朴酚衍生物CT2-3对结肠癌细胞的抑制作用及其机制》


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取对数生长期的SW480和Lo Vo细胞,以3.0×105个/孔接种于6孔细胞培养板,设空白组和CT2-3(40μmol·L-1)组共2组。孵育过夜后,空白组细胞更换培养液,CT2-3组给予CT2-3终浓度为40μmol·L-1的培养液。干预24 h后收集细胞,并提取总RNA。每孔加入RNAiso Plus 1 m L,裂解5 min后将细胞裂解液转至1.5 m L离心管,每管加入三氯甲烷200μL,剧烈震荡15 s后室温静置5 min。4℃,12 000 r·min-1离心15 min;吸取上清液450μL转移至另一新的1.5 m L离心管,每管加入异丙醇450μL,室温静置10 min,然后4℃,12 000 r·min-1离心10 min;弃上清,每管加入75%乙醇1 m L,然后4℃,7 500 r·min-1离心5 min;弃上清,室温干燥2~5 min,加入RNase-free水10~30μL溶解,并检测总RNA质量和浓度。按照反转录试剂盒说明书,将总RNA反转录成c DNA,通过Realtime PCR扩增目的基因。引物由北京睿博兴科生物技术有限公司合成,见表1。采用2-△△Ct法分析目的基因相对表达水平。