《表1 基因引物序列：自体来源诱导性多能干细胞移植治疗大鼠急性肺损伤》

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《自体来源诱导性多能干细胞移植治疗大鼠急性肺损伤》

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（1） 荧光实时定量PCR检测Oct4、Nanog、SSEA-4和Sox2基因的表达:参照文献[21]方法，收集生长良好的第3代诱导性多能干细胞克隆，Trizol法冰上裂解细胞提取总RNA，凝胶电泳法检测提取的RNA质量，选取抽提质量好的总RNA，随机引物反转录获得c DNA，应用试剂盒进行扩增反应；反应条件:95℃预变性30 s，94℃变性10 s，55℃退火15 s，72℃延伸15 s，共45个循环，以β-actin为对照，引物序列见表1；（2）免疫细胞化学荧光染色检测Oct4、Nanog、SSEA-4和Sox2蛋白的表达:参照文献[22]方法，将诱导性多能干细胞用预冷的丙酮固定5 min，PBS洗涤3次，每次5 min，用0.1%Triton X-100室温孵育3 min给细胞膜打孔，用体积分数为10%山羊血清室温避光封闭10 min，随后加入兔抗鼠Oct4（1∶50）、Nanog（1∶200）、SSEA-4（1∶100）、Sox2（1∶50）和β-actin（1∶500）抗体，4℃避光孵育过夜，次日PBS漂洗3次，每次5 min，加入荧光标记的二抗（1∶2 000），荧光显微镜下观察、摄片。