《表1 引物序列:姜黄素和硫酸镁联合应用协同促进炎性软骨细胞的逆分化》

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《姜黄素和硫酸镁联合应用协同促进炎性软骨细胞的逆分化》


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培养至第2代的4组细胞分别用反转录试剂盒(Takara公司)提取总RNA,并用分光光度仪检测RNA浓度,总RNA定量后通过反转录试剂盒(Takara公司)即20μL反应体系:1μg总RNA均调整为10μL,Master Mix为10μL,反转录反应为37℃15 min,85℃5 s,反转录为c DNA,然后以20μL反应体系进行QPCR反应(QPCR试剂盒Takara公司),即Taq酶10μL,上游引物0.8μL,下游引物0.8μL,Dye 0.4μL,DNA模板2μL(<100 ng),灭菌蒸馏水6μL。采用Step one plus Real-time PCR System,预变性:1个循环,95℃,30 s。PCR反应:40个循环,95℃,5 s,60℃,30 s,然后通过Prism 5分析软件进行分析。引物序列见表1。