《表1 引物序列信息:可注射RGD功能化的透明质酸果胶水凝胶促进体外成软骨的研究》

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《可注射RGD功能化的透明质酸果胶水凝胶促进体外成软骨的研究》


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包裹软骨细胞的水凝胶在培养21d后收集样品,根据Thermo试剂盒说明书,用Trizol提取RNA,所提取的总RNA进行逆转录为cRNA,然后进行RT-PCR反应。以β-actin为内参基因,Ⅰ型胶原(CoLⅠ)和Ⅱ型胶原(CoLⅡ)为目标基因。反应程序设定如下:95℃预变性10min;循环数45,95℃变性5 min,60℃下退火延伸60s;末段延伸60℃5min;溶解曲线75℃至95℃中,每20s升温1℃,每轮循环结束后采集荧光信号,待全部循环完成后,对溶解曲线进行分析以确保产物的特异性。数据处理采用ΔΔCT算法。所使用引物序列见表1。