《表1 基因引物序列:桑黄与雷公藤序贯联合治疗对局灶节段肾小球硬化大鼠肾损伤的影响及机制》

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《桑黄与雷公藤序贯联合治疗对局灶节段肾小球硬化大鼠肾损伤的影响及机制》


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TRIzol提取细胞总RNA。取约2μg总RNA逆转录成c DNA,并进行Real-time荧光定量PCR扩增,GAPDH作为内参照。引物序列见表1。PCR反应体系(10μL):SYBR Premix Ex Taq(2×) 5μL,Forword Primer(10μmol·L–1)0.5μL,PCR Reverse Primer(10μmol·L–1) 0.5μL,c DNA 0.5μL,dd H2O3.5μL,于ABI PRISM 7500荧光定量PCR扩增仪上进行反应,先95℃预变性10 s,然后按下述条件循环40次:变性95℃×5 s,退火60℃×31 s。结果用2–△△ct计算目的m RNA表达水平。