《表1 各抗性基因特异标记检测引物》

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《江苏省多基因聚合对水稻稻瘟病抗性的效应分析及Pb1基因功能标记开发》

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水稻基因组DNA提取采用SDS法（孙立亭等，2017）。根据等位基因PCR扩增原理，针对Pita、Pi54、Pib、Pikm、Pb1和Pizt抗感等位基因序列的差异设计特异引物（表1）。以基因组DNA为模板，PCR克隆稻瘟病抗性基因标记。反应体系10.0μL:1.2μL10×Taq Buffer，50 ng/μL基因组DNA 1.5μL，2 mmol/L上、下游引物各0.5μL，1 mmol/L dNTP0.3μL，1000 U Taq DNA聚合酶0.1μL，ddH2O补足至10.0μL。扩增程序:95℃预变性5 min；94℃30 s，55℃30 s，72℃40 s，进行33个循环；72℃延伸10 min。Pita和Pib基因标记的扩增产物用4%聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测，其他基因标记的扩增产物用8%聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测。取PCR产物2.0μL，以100 bp-ⅠDNA Ladder作为DNA Marker，在240 V恒压下电泳1 h。最后，采用银染法显示DNA条带。