《表1 基因克隆中用到的引物序列》

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《基于转录组测序黑老虎角鲨烯合酶基因克隆和生物信息学分析》

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以黑老虎叶片总cDNA为模板，PCR反应体系为cDNA 2.0μL；Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 0.5μL；引物（F/R）各0.5μL；dNTP 0.5μL；2×Phanta Max Buffer 12.5μL；ddH2O 8.5μL。所用引物见表1。PCR反应程序:95℃预变性3 min，进行32个循环，95℃变性15 s，57℃退火15 s，72℃延伸90 s，循环结束后72℃终延伸5 min，4℃保存。1%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，对扩增所得目的片段进行切胶回收。将回收产物与pColdⅠ载体连接，转化E.coli DH5α菌株，涂布含有氨苄抗性的LB平板培养基上，于37℃培养箱过夜培养。次日挑选单克隆，菌液经PCR检测后，得到阳性克隆菌株，将其送至广州擎科生物科技有限公司进行测序。