《表1 qRT-PCR引物序列》

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《YAP1-JUN促进人喉鳞状细胞癌细胞增殖及EMT的机制研究》

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将细胞接种于12孔板，每孔104个细胞，24 h后吸去上清液，分别转染YAP1过表达质粒及对应空载，转染48 h后收集细胞。采用Trizol法提取细胞总RNA，使用Thermo公司的NANODROP2000分光光度计测定RNA的浓度和纯度，点样量为1μl，通过仪器分析及计算机直接读出浓度（mg/L），并根据A260/A280比值判断纯度。然后按逆转录试剂盒说明书方法体外逆转录得到cDNA，再以cDNA为模板，按照TAKARASYBR RT-PCR试剂盒说明书体系及方法检测E-cadherin，N-cadherin，vimentin，β-catenin的转录水平。引物序列见表1。每个样本3个复孔，按两步法PCR扩增，条件如下:⑴95℃30 s；⑵95℃5 s，60℃30 s（40个循环）；⑶溶解曲线（Bio-Rad CFX96）。反应结束后确认qRT-PCR的扩增曲线及溶解曲线是否满足要求，仪器软件中自动输出Ct值，计算相对表达量采用2-△△Ct方法，按照下列公式计算:△Ct（目的基因）=Ct（目的基因）-Ct（内参基因），ΔΔCt=ΔCt（转染YAP1细胞）-ΔCt（转染空载细胞）。