《表1 实验所用荧光定量PCR引物序列》

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《急性氨氮胁迫下大弹涂鱼解毒代谢途径的研究》

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参照NCBI，GenBank中大弹涂鱼GS（XM＿020921461），CA15（XM＿020925341），NHE（XM＿020941797），Rhcg1(KU229861.1）基因cDNA序列，Primer Premier 6.0软件设计特异扩增引物（表1），分别测定肝脏中GS基因及鳃组织中CA15，NHE，Rhcg1基因mRNA表达量。取肝、鳃组织在液氮中研磨成粉末，Trizol试剂提取组织总RNA，沉淀用DEPC溶解，检测RNA浓度和A260/A280值，琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，TransScript All-in-one FirstStrand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(One-Step gDNA Removal）试剂盒反转录合成cDNA，凝胶电泳图像呈单一明亮条带。实时荧光定量PCR采用SYBR Premix ExTaq试剂于罗氏LightCycler 480上进行分析，PCR体系为：95℃3 min；95℃10 s，57-61℃（不同引物退火温度不同）30 s，40个循环；95℃5 s。以β-actin作为内参基因，以2-ΔΔCt法计算基因的相对表达量。