《表1 本研究基因克隆及定量表达的引物》

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《邓恩桉EdDREB2基因的克隆和表达分析》

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以Actin基因为内参基因，利用Oligo6软件设计Actin和EdDREB2基因的实时荧光定量PCR引物（表1），检测EdDREB2基因在邓恩桉对照、低温诱导1 h、3 h、6 h、12 h、24 h的表达情况。本研究利用CFX96实时荧光定量PCR仪器进行检测。qRT-PCR的反应体系为：SYBR Premix Ex TaqⅡ（Tli RnaseH Plus）（2×） 12.5μL，EdDREB2＿qF/EdDREB2＿qR（10μmol/L）各1μL，DNA模板（50 ng）2μL，灭菌水8.5μL，总共25μL。qRT-PCR的反应程序：95℃30 s；95℃10 s；60℃30 s；40 cycles；95℃10 s，65℃，-95℃，5℃/5 s，使用2-ΔΔCt方法求出基因的相对表达量。试验采用3次生物学重复。