《表1 试验中所用的引物》

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《遮阴对抹茶茶园土壤微生物特性及土壤酶活性的影响》

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采用PCR-DGGE法。按照土壤提取试剂盒提取总DNA，并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析。细菌16 S rDNA V3片段的扩增采用通用引物对R518/F341，引物序列见表1。扩增条件为94℃，预变性2 min；98℃变性10 s，58℃退火15 s，68℃延伸1 min，25个循环。细菌基因组PCR扩增产物经QIAquick Gel Extraction Kit（Qiagen货号:28704）进行纯化，并对PCR扩增产物进行电泳分离。将PCR产物加入到10%的聚丙烯酰胺凝胶中，采用40%～60%凝胶变性梯度。电泳条件:缓冲液1×TAE，温度60℃，电压100 V，时间20 h。电泳结束后，采用硝酸银快速银染。用凝胶成像分析系统分析染色后的凝胶，观察电泳条带并拍照。选择条带切胶回收、连接pEasy-T载体，将其转化大肠杆菌DH5α感受态细胞后，送TaKaRa公司进行测序。将有效序列在NCBI的Blast程序进行比对，找出与目的片段相似度高的菌种[14-15]。