《表1 试验中所用的引物》

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《大螟水通道蛋白SiAQP基因的克隆与表达分析》

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根据昆虫水通道蛋白的特征序列设计一对兼并引物（表1），以所得的cDNA第一链为模板对中间片段进行扩增。扩增体系为：2×Taq Master Mix（Dye Plus）12.5μL（购自南京诺唯赞公司）、c DNA 1μL、上下游引物各1μL、dd H209.5μL，共25μL。PCR程序为：94℃预变性3 min，94℃变性30 s，65℃退火30 s，72℃延伸30 s，退火温度降1℃循环，19个循环，然后94℃变性30 s，45℃退火30 s，72℃延伸1 min，最后72℃延伸10 min。反应结束后用1%琼脂糖凝胶进行电泳，使用Axyprep DNA凝胶回收试剂盒（购自美国AxyGen生物技术有限公司）分离纯化PCR产物。胶回收产物与pGEM-T Easy Vector载体（购自美国Promega公司）进行连接，然后将连接产物转化入DH5α感受态细胞中。挑取白色单菌落进行PCR鉴定，将阳性菌液送往上海生工生物工程公司测序。