《表2 qRT-PCR引物》

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《北柴胡和狭叶柴胡中黄酮类成分及其关键酶基因表达的组织差异分析》

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利用q RT-PCR的方法检测北柴胡、狭叶柴胡中黄酮类成分合成关键酶基因的组织表达模式。北柴胡以延伸因子EF1α基因为内参[16]，狭叶柴胡以微管蛋白β-tubulin基因为内参。qRT-PCR法分别检测北柴胡、狭叶柴胡不同组织（根、茎、叶、果实）中IFS、F3H、DFR基因表达量（转录组数据库中北柴胡及狭叶柴胡同源IFS基因编号分别为HHH＿rep＿c6754、ZZZ＿rep＿c363；同源F3H基因编号分别为ZZZ＿rep＿c8447、HHH＿c9371；同源DFR基因编号分别为HHH＿rep＿c2965、ZZZ＿rep＿c2235）。每个反应重复3次，各基因以根中的表达量作为对照，采用2-ΔΔCt法分析结果。反应体系:灭菌水7.5μL，SYBR?Premix Ex TaqTM10μL，引物各0.5μL，50×ROX Reference Dye II0.5μL，cDNA模板1μL，总计20μL。反应程序:94℃预变性30 s；45个循环（94℃变性5 s，55℃退火30 s，72℃延伸20 s）。所用各引物序列见表2。