《Table 1 Primers used in this study》

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《泛素活化酶Ube1活性中心疏水区关键苯丙氨酸位点的丙氨酸突变对泛素传递活性的影响》

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取连接产物3 mL，通过电转化的方法转入50mL E.coli XL1-Blue感受态细胞中，加入1 mL SOC并在37℃复苏1 h，涂布于含70 mg/mL卡那霉素的LB平板上，37℃过夜培养；第2 d，挑取多个单菌落分别接种于5 mL含70 mg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37℃，220 r/min培养过夜；第3d，使用QIAGEN试剂盒抽提质粒，并测定质粒浓度。先用测序引物Bo 176确认是否成功引入3个突变F637A、F729A和F741A。再用引物Bo 173、Bo 174、Bo 175、Bo 177以及Jun 13、Jun 14测序确定其他部分的基因序列是否正常，测序引物序列见Table 1。