《Table 2 Mutant primers for peptides》

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《苦荞α-螺旋发夹抗菌肽的分子改造抑制植物真菌活性》

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为优化Ft AMP的α-螺旋结构，提高抗菌性，依据螺旋轮投影方法（http://rzlab.ucr.edu/scripts/wheel/wheel.cgi）[17]，通过定点突变的方法使两亲性α螺旋肽的亲水侧面和疏水侧面更加规范。以构建的载体pGEX-4T-1-FtAMP作为模板，使用Table 2中的引物，采用Ta KaRa MutanBEST试剂盒方法通过PCR扩增出相应突变位点，然后进行自身连接环化反应，再转化E.coli DH5α细胞，筛选重组质粒，分别获得单克隆菌落。提取质粒后，通过酶切验证与DNA测序方法确认克隆产物的正确性，突变成功的菌种及质粒贮存在-80℃冰箱备用。