《Table 1 Prim ers used for am plification of candidate effectors excluding signal peptide》

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《葡萄座腔菌候选效应子抑制了Bax诱导的PCD反应并促进烟草疫霉的侵染》

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在实验室前期研究基础上，设计扩增去信号肽的效应基因引物（表1）；收集PDA培养基上生长5～7 d的ZY7菌株的菌丝体，在液氮中研磨成粉状后用柱式试剂盒（上海生工）提取RNA，经反转录酶（TaKaRa）反转录成cDNA备用。利用PCR方法从葡萄座腔菌ZY7的cDNA中扩增候选效应子。PCR体系为50μL，包含10×PCR buffer 5μL，2.5 mmol·L-1d NTPs 4μL，正向引物（10 mmol·L-1）1μL，反向引物（10 mmol·L-1）1μL，Ex Taq酶（PrimeSTAR HS DNA polymerase，TaKaRa）0.25μL，模板cDNA 1μL，ddH2O 37.75μL。PCR条件为，95℃2 min；95℃30 s，54℃30 s，72℃45 s，35个循环。PCR产物通过1%的琼脂糖凝胶进行分离并使用DNA凝胶回收试剂盒（Axygen）进行纯化。将回收片段与经Xma I/Sal I线性化的PVX载体连接。将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。挑取阳性克隆送华大基因有限公司测序。