《表2 测序分析采用的引物信息Table 2 Inform ation of prim er for sequencing analysis》

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《不同生理阶段荷斯坦奶牛瘤胃细菌多样性研究》

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根据试剂盒（Omega Bio-tek公司，美国）说明书进行总DNA抽提，DNA浓度和纯度利用Nano Drop2000进行检测，利用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取质量；用338F/806R引物对V3~V4可变区进行PCR扩增。扩增程序为:95℃预变性3 min，27个循环（95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s），最后72℃延伸10 min（PCR仪:9700型）。扩增体系为20μL，4μL 5×Fast Pfu缓冲液，2μL2.5 mmol/L d NTPs，0.8μL引物（5μmol/L），0.4μL Fast Pfu聚合酶；10 ng DNA模板。