《表2 MLBC1215全基因测序引物Table 2 Primers used for analysis of the whole genome sequence of MLBC1215》

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取140μl MLBC1215病毒株在BHK-21细胞的培养上清液,用QIAamp viral RNA mini kit(美国QIAGEN公司)按说明书提取病毒RNA,利用Readyto-GoTM You prime First-Strand Beads(英国GE Healthcare公司)试剂逆转录,制备病毒基因组cDNA文库。PCR扩增使用表2中Primer 5.0软件设计的引物进行MLBC1215病毒基因目的片段扩增。扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测,阳性产物经过切胶回收纯化(QIAGEN)后,连接入pGEM-Teasy载体(美国Promega公司)进行序列测定。