《Table 1 The prim ers used in this experim ent》

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《小麦黄花叶病毒Nib蛋白介导的体外转录体系的创建》

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Note:Italic nucleotides indicating T7 promoter；Underlined nucleotides indicating enzymes；int:Internal sequences.

将含有WYMV Nib、VPg、14K和P3编码序列的原核表达质粒分别转化大肠杆菌Rosetta的感受态细胞，并涂布含有100 mg·mL-1氨苄青霉素的LB平板。挑取含重组质粒的Rosetta菌株置于5mL的LB液体培养基中（含Ampr），37℃，200 r·min-1培养箱中培养过夜；取过夜培养的菌液按1∶100加入到3 0 mL新鲜的LB液体培养基中（含Ampr），37℃，200 r·min-1，培养至OD600达0.4～0.6之间；将新鲜培养的菌液置冰上10 min，然后以3 mL/管分配至指状管。加入IPTG至终浓度分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mmol·L-1。37℃，200 r·min-1培养4 h；13 000 r·min-1，离心30 s，收集菌体。加入100μL的1×SDS蛋白上样缓冲液，振荡悬浮；然后进行SDS-PAGE，染色以及脱色处理，检测目的条带。