《表1 定点突变引物及其序列》

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《利用脯氨酸效应提高短乳杆菌谷氨酸脱羧酶的热稳定性》

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以来源于T.kodakarensis GAD的氨基酸序列为参照，使用DNAMAN软件进行序列比对获取目标蛋白中可引入Pro的氨基酸残基位点，并设计相应定点突变PCR引物。以pET28a（+）-GAD质粒为模板，采用表1中的引物，PCR克隆获取目标突变体质粒基因；使用DpnⅠ对PCR反应产物进行消化处理（37℃，2 h），以消除父本模板；采用热击转化法将克隆产物转入E.coli DH5α感受态细胞中。突变体质粒经通用生物系统（安徽）有限公司测序验证后进一步转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中，获取目标重组菌株。