《表1.定点突变所用的引物》

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《大肠杆菌tRNA~(Sec)关键核苷酸位点》

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根据pCDF-SelC基因序列设计引物（表1），在selC基因上引入定点突变[21–22]。以pCDF-SelC质粒为模板，进行反向PCR，用Dpn I/Eco31 I双酶切PCR产物，采用T4 DNA连接酶进行自连，获得重组质粒pCDF-SelC?，DNA测序结果验证了在相应的位点上引入了预期突变。利用Acc65 I/Xba I双酶切pCDF-SelC?以及pSUABC，分别切胶回收400 bp、7000 bp左右处片段，用T4 DNA ligase连接，获得pSUABC?重组表达质粒。引物合成和DNA序列测定委托生工生物工程（上海）股份有限公司完成。