《表1 定点突变实验所用引物》

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《醇脱氢酶KpADH的127位点对催化活性和对映选择性的影响》

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以pET28a-Kp ADH为模板，进行全质粒PCR操作，反应体系为：10×KOD Plus Neo Buffer 2μL，dNTPs 2μL，MgSO41.2μL，上游引物（10μmol/L)0.3μL，下游引物（10μmol/L)0.3μL（引物见表1），模板WTKp ADH（20mmol/L）0.3μL，DNA聚合酶0.4μL，ddH2O补足至20μL。PCR扩增程序为：95℃预变性6min，98℃变性10s，55℃退火30s，68℃延伸3.5min，循环25次，68℃延伸10min，4℃保存。