《表1 引物名称及序列:苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11定点突变对棉铃虫杀虫活性的影响》

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《苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11定点突变对棉铃虫杀虫活性的影响》


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以转化E.coli JM109的pET-vip3Aa11质粒为模板,以I358V-F、I358V-R等定点突变引物对(表1)为引物,PCR扩增pET-vip3Aa11基因全长片段。反应体系:质粒1μL,突变引物(10μM)各1μL,2×TransStart FastPfu PCR SuperMix 25μL,加ddH2O至50μL。PCR扩增条件:94℃预变性2 min;94℃变性20 s,55℃退火20 s,72℃延伸3 min,23个循环,最后72℃延伸10 min。