《表1 引物序列表：定点突变提高过氧化氢酶热稳定性和催化效率》

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《定点突变提高过氧化氢酶热稳定性和催化效率》

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注：引物中引入的突变位点用下划线标注。

以B.pumilus ML 413的DNA为模板，用引物KatX2 F和KatX2 R（表1）进行PCR扩增得到过氧化氢酶基因。扩增产物经纯化后与克隆载体pMD18-T连接获得重组质粒pMD18T-KatX2.用Bam HI和Mlu I对pMD18T-KatX2和pMA5分别进行双酶切，纯化后，将得到的KatX2和线性化的pMA5进行连接获得重组质粒pMA5-KatX2，随后将该重组质粒利用Spizizen描述的方法转化到枯草芽孢杆菌168中[26]。以重组质粒pMA5-KatX2为模板，用表1所示的引物进行重叠延生PCR的方法进行定点突变[27]。含突变基因的质粒转入到大肠杆菌JM109中并验证，并送生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序，测序正确的重组质粒转入到枯草芽孢杆菌168中进行表达，以菌株B.subtilis 168/pMA5-KatX2作为对照。