《表1 耐药基因的引物序列》

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《圆眼燕鱼哈维弧菌的分离鉴定及药敏试验》


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使用高纯度细菌质粒提取试剂盒提取质粒,选择β-内酰胺类抗生素耐药基因TEM,磺胺类耐药基因Sul2,氨基糖苷类耐药基因ANT(3\"")-1,四环素类耐药基因tet(A)[12-13]和喹诺酮类耐药基因QnrA[14](表1),检测分离菌株质粒携带耐药基因。PCR反应体系为20μL:2×ESTaq Master Mix 10μL,质粒DNA模板1μL,上、下游引物各1μL。ANT(3′′)-1、QnrA、TEM和Sul2基因检测反应条件为:94℃2min;94℃30s,60℃30s,72℃1min,共35个循环;72℃延伸5min。而tet(A)的反应条件为:94℃5min;94℃1min,57℃1 min,72℃1 min,共30个循环;72℃10min。反应结束后分别取4μL PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,观察结果。