《表1 检测耐药基因的引物序列》

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《乌鲁木齐市宠物犬、猫粪源大肠杆菌耐药性分析与ESBLs基因型检测》

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采用煮沸裂解法提取分离株总DNA作为PCR模板，提取本实验室保存的携带ESBLs耐药基因的菌株总DNA作为PCR阳性对照。根据参考文献[16-19]合成ESBLs耐药基因，包括CTX-M (CTX-M-1G、CTX-M-2G和CTX-M-9G）、TEM和SHV，引物（表1）均由上海生工生物工程有限责任公司合成。PCR反应体系25μL:Mix 12.5μL，ddH2O9.5μL，上下游引物各1μL，模板DNA 1μL。反应条件：94℃预变性5min；94℃变性30s，48℃退火30s，72℃延伸1 min，共30个循环；72℃再延伸10min，根据不同扩增基因调整退火温度。