《表1 基因型耐药性检测及测序引物序列》

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《云南省临沧地区2009-2014年HIV-1基因型耐药情况分析》

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注:a为测序引物；HXB2为标准参考株

提取的RNA经逆转录后，用RT-PCR完成对样本靶基因的扩增，即先用一步RT-PCR方法完成逆转录和第1轮PCR，使用大连宝生物公司TaKaRa One Step RNA PCR Kit（AMV）试剂盒，再以第1轮PCR产物为模板进行第2轮PCR。耐药检测使用引物见表1，耐药检测反应体系及程序参照文献[2]。PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，切下目的片段，采用德国Qiagen公司Qi Aamp Gel Extraction Kit进行回收，回收片段委托北京诺赛基因有限公司进行序列测定。所使用的方法扩增产物长度为1 170bp，包括蛋白酶基因全长（1～99氨基酸）和逆转录酶基因至少前254个氨基酸（1～254氨基酸）。