《表1 PCR引物序列：耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及产金属β-内酰胺酶基因型分析》

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《耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及产金属β-内酰胺酶基因型分析》

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PCR检测金属β-内酰胺酶基因根据参考序列设计引物，相关基因的引物序列见表1，引物设计参考国内外现有的文献报道[10-12]。PCR扩增体系为:2.5μL 10×Taq Buffer（20 mmol/L Mg2+），0.5μL dNTPs（2.5 mmol/L），上下游引物各1μL（10μmol/L），DMSO 2.5μL，Taq DNA Polymerase 0.5μL（1.5 U/μL），DNA模板50～100 ng，ddH2O补足至23μL。MBLs的热循环参数为:94℃预变性5 min，然后94℃30 s→52℃40 s→72℃50s，循环30周期，最后一个72℃延伸5 min。产物经2%琼脂糖凝胶电泳，以100 bp DNA Marker为标准确定位点分子质量，空白水为阴性对照，出现与目的产物分子相当的条带为阳性。