《表1 PCR引物序列：经头孢他啶诱导产生亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌的耐药表型及其耐药机制研究》

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《经头孢他啶诱导产生亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌的耐药表型及其耐药机制研究》

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PCR法分别扩增铜绿假单胞菌5种金属β-内酰胺酶（MBLs）基因IMP、VIM、SIM、GIM、SPM和7种超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因TEM、VEB、SHV、PER、OXA-2以及OXA-10，2种Amp C酶基因PDC、DHA，3种整合酶基因int Il、int I2和int I3。引物序列与退火温度见表1。PCR扩增体系采用50ul体系，具体如下:TE buffer 5ul，d NTP 4ul，上、下游引物各1ul，Taq酶0.25ul，DNA模板2ul，dd H2O补足体系。PCR扩增条件:金属酶类，94℃预变性5min，94℃30s，退火30s，72℃延伸60s，共35个循环，最后72℃延伸7min。超广谱β-内酰胺酶和整合酶，Amp C酶:扩增产物>500bp，93℃预变性5min，然后94℃60s，55℃退火60s，72℃延伸60s，共35个循环，最后72℃延伸5min；PCR产物<500bp，93℃预变性5min，然后93℃30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环，最后72℃延伸5min。PCR扩增产物加入10ul6×DNA loading buffer，经琼脂糖凝胶电泳，120m V电泳30-40min，紫外灯下观察结果，出现目的条带即认为阳性，拍照保存。